Mannheimia varigena as the etiologic agent of lameness and coronary band lesion in cattle / Mannheimia varigena como agente etiológico de claudicação e lesão na banda coronária em bovinos

Mannheimia varigena was identified as the etiologic agent of lameness and coronary band lesion in 30% of cattle in a farm located in Rio Grande do Sul, Brazil. Swab samples from the lesions were cultured in McConkey Agar and Blood Agar for microbiological identification. Culture growth was submitted to Gram staining and Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) identification. Antimicrobial susceptibility test based on disc diffusion was performed for three antibiotics: ceftiofur, gentamicin and florfenicol. Furthermore, molecular characterization of 16S rDNA gene sequencing was performed and the data was used in a phylogenetic analysis. For that purpose, total DNA was extracted by thermo extraction directly from the bacterial colonies and the polymerase chain reaction (PCR) was performed. Gram-negative Mannheimia varigena strain LBV010/22 was identified as the causative of the lesions. The strain was susceptible to all antibiotics tested. The phylogenetic analysis demonstrated that the analyzed strain is closely related to M. varigena strains from pyelonephritis and respiratory tract. Overall, this is the first report of M. varigena as the causative agent of coronary band injury in bovine. Therefore, our findings show the importance of an accurate microbiological identification of infectious agent in lameness cases in order to prevent the occurrence and perform an appropriate treatment in the future.

Mannheimia varigena foi identificada como agente etiológico de claudicação e lesão de banda coronária em 30% dos bovinos de uma fazenda localizada no Rio Grande do Sul, Brasil. Amostras de swab das lesões foram cultivadas em Ágar McConkey e Ágar Sangue para identificação microbiológica. O crescimento da cultura foi submetido à coloração de Gram e identificação por Espectrometria de Massa de Ionização por Dessorção a Laser Assistida por Matriz (MALDI-TOF MS). O teste de suscetibilidade antimicrobiana baseado na difusão em disco foi realizado para três antibióticos: ceftiofur, gentamicina e florfenicol. Além disso, foi realizada a caracterização molecular do sequenciamento do gene 16S rDNA e o resultado utilizado para análise filogenética. Para tanto, o DNA total foi extraído por termoextração diretamente das colônias bacterianas e uma reação em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada. Foi identificada como causadora das lesões a cepa gram-negativa de Mannheimia varigenaLBV010/22. Ela foi suscetível a todos os antibióticos testados. A análise filogenética demonstrou que a cepa analisada está intimamente relacionada às M. varigena presentes em pielonefrite e no trato respiratório. No geral, este é o primeiro relato de M. varigenacomo agente causador de lesão de banda coronária em bovinos. Portanto, nossos achados mostram a importância de uma identificação microbiológica precisa do agente infeccioso nos casos de claudicação, a fim de prevenir a ocorrência e realizar um tratamento adequado no futuro.

Larvoscopic study on Dictyocaulus sp. in the faeces of beef cattle in northeastern Brazil / Estudo larvoscópico de Dictyocaulus sp. em fezes de bovinos de corte do nordeste do Brasil

Abstract The lungworm Dictyocaulus viviparus has an important role in cattle health and productivity worldwide, since infections can lead to substantial economic losses. Despite its importance, few studies investigating the epidemiological aspects of infection by this parasite have been conducted. The aim of this study was to report the occurrence of lungworm infection in beef cattle herds reared in an area of livestock production in the northeastern region of Brazil. From September 2020 to August 2021, monthly fecal samples (n = 493) were collected from 46 beef cattle. Among all the animals assessed, lungworm larvae were detected in 8.7% (4/46). None of them presented any clinical sign suggestive of infection by lungworm parasites. Twenty larvae were retrieved, with the minimum number (n = 1) detected in October and December, and the maximum number (n = 13) in November. These presented a mean length of 363 μm (± 28.65 μm) and mean width of 19 μm (± 1.03 μm), and were morphologically similar to Dictyocaulus sp.. This study reports the occurrence of this parasite in this livestock production area. Lastly, local veterinarians need to be aware of inclusion of this parasite in the differential diagnosis of other respiratory infections in beef cattle.

Resumo O parasito pulmonar Dictyocaulus viviparus tem um papel importante na saúde e produtividade bovina em todo o mundo, uma vez que infecções podem levar a perdas econômicas. Além de sua importância, poucos estudos que investigam aspectos epidemiológicos das infecções por esse parasito têm sido realizados. Objetivou-se, nesta pesquisa, relatar a ocorrência de infecção por nematódeos pulmonares em rebanhos bovinos de corte, criados em uma importante área de produção pecuária, na região Nordeste do Brasil. De setembro de 2020 a agosto de 2021, foram coletadas, mensalmente, amostras fecais (n = 493) de 46 bovinos de corte. De todos os animais avaliados, larvas de nematódeos pulmonares foram detectadas em 8,7% (4/46). Os animais não apresentaram nenhum sinal clínico sugestivo de infecção por parasitos pulmonares. Vinte larvas foram recuperadas, com o número mínimo (n = 1) detectado em outubro e dezembro, e o número máximo (n = 13) em novembro. Apresentavam comprimento médio de 363 μm (± 28,65 μm), largura média de 19 μm (±1,03 μm) e eram morfologicamente semelhantes a Dictyocaulus sp.. Este estudo relata a ocorrência desse parasito nesta área. Logo, os veterinários locais devem estar atentos à inclusão desse parasito no diagnóstico diferencial de outras infecções respiratórias em bovinos de corte.

Evaluation of techniques for diagnosis of Trypanosoma vivax infections in naturally infected cattle in the Zona da Mata Mineira / Avaliação de técnicas para diagnóstico de infecções por Trypanosoma vivax em bovinos naturalmente infectados na Zona da Mata Mineira

Abstract This study aimed to evaluate diagnostic techniques for trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, in naturally infected cattle in Minas Gerais, Zona da Mata. The deaths of six lactating cows with similar clinical conditions—characterized by hyporexia, hypogalactia, and recumbency—had been reported from one property. Initially, two animals were examined and diagnosed with trypanosomiasis through identification of the protozoan in a blood smear. After the initial diagnosis, all lactating cows (n=37) on the property were examined, and blood samples were collected for tests including whole blood smear, buffy coat smear, Woo's technique, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and polymerase chain reaction (PCR). Woo's test, buffy coat smears, and whole blood smears indicated that 4/37 (10.81%) animals were positive for trypanosomiasis, whereas ELISA and PCR indicated that 33/37 (89.19%) and 27/37 (72.97%) animals, respectively, were positive. The agreement obtained between parasitological techniques was classified as high, while between ELISA and PCR, no agreement. In conclusion, parasitological techniques have a low capacity to identify infected animals in the chronic stage of T. vivax infection. Therefore, techniques such as PCR and/or ELISA should be used to minimize the occurrence of false negatives.

Resumo Este estudo objetiva avaliar as técnicas de diagnóstico da tripanossomíase, causada pelo Trypanosoma vivax, em bovinos naturalmente infectados, em Minas Gerais, Zona da Mata. A morte de seis vacas em lactação com condições clínicas semelhantes - caracterizadas por hiporexia, hipogalaxia e decúbito - foi relatada em uma propriedade. Inicialmente, dois animais foram examinados e diagnosticados com tripanossomíase através da identificação do protozoário em esfregaço sanguíneo. Após o diagnóstico inicial, todas as vacas em lactação (n = 37) na propriedade foram examinadas, e amostras de sangue foram coletadas para testes, incluindo esfregaço de sangue total, esfregaço de capa leucocitária, técnica de Woo, ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação em cadeia da polimerase (PCR). O teste de Woo, os esfregaços de capa leucocitária e de sangue total indicaram que 4/37 (10,81%) animais foram positivos para tripanossomíase, enquanto ELISA e PCR indicaram que 33/37 (89,19%) e 27/37 (72,97%) animais, respectivamente, foram positivos. A concordância entre técnicas parasitológicas foi classificada como alta, enquanto entre ELISA e PCR, sem concordância. As técnicas parasitológicas apresentam baixa capacidade para identificar animais infectados na fase crônica da infecção por T. vivax. Dessa forma, técnicas como PCR e/ou ELISA devem ser utilizadas para minimizar a ocorrência de falsos negativos.

Inquérito sorológico de brucelose em machos e fêmeas bovinas em fazendas do Estado de Mato Grosso do Sul / Serological survey of brucellosis in males and females of cattle in the State of Mato Grosso do Sul

Objetivou-se avaliar a ocorrência de animais soro reagentes à brucelose bovina em fazendas localizadas no Estado de Mato Grosso do Sul, por meio de exame sorológico utilizando o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e discutir as possíveis diferenças entre as soroprevalências de fêmeas e machos. Foram avaliados, a partir do teste de triagem com Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), 724 bovinos da raça Nelore, sendo 274 machos e 450 fêmeas, provenientes de oito propriedades com histórico de problemas reprodutivos. O teste foi procedido conforme o protocolo determinado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). Os resultados demonstraram baixa soroprevalência da doença nos bovinos testados, sendo detectada prevalência para a doença de 1,10% nos machos e 2,88% nas fêmeas.Quando se considera o touro isoladamente nos rebanhos, pode-se perceber que a fertilidade é muito mais importante nos machos do que nas fêmeas individualmente, uma vez que os touros podem se acasalar com um número muito maior de fêmeas, seja na monta natural ou na inseminação artificial, demonstrando a importância do inquérito epidemiológico na população geral, principalmente nos machos. A maior frequência da doença foi encontrada nas fêmeas podendo estar relacionada à infecção por Brucella spp. no ambiente decorrente de parto ou aborto tornando as fêmeas transmissoras permanentes da doença.

The objective of this study was to evaluate the occurrence of seroreactive animals to bovine brucellosis in farms located in the State of Mato Grosso do Sul, by means of a serological examination using the Acidified Buffered Antigen (AAT) and to discuss the possible differences between the seroprevalence of females and males. A total of 724 Nellore cattle, 274 males and 450 females, from eight farms with a history of reproductive problems, were evaluated using the screening test with Acidified Buffered Antigen (AAT). The test was carried out according to the protocol determined by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA).The results showed a low seroprevalence of the disease in the tested cattle, with a prevalence of 1.10% in males and 2.88% in females.When considered the bull alone in herds, it can be shown that fertility is much more important in males than in females individually, since bulls can mate with a much larger number of females, either in natural mating or in artificial insemination, demonstrating the importance of epidemiological survey in the general population, especially in males. The highest frequency of the disease was found in females and may be related to infection by Brucella spp. in the environment from childbirth or abortion making females permanent transmitters of the disease.

An abortion storm in dairy cattle associated with neosporosis in southern Brazil / Um surto de abortamento em vacas leiteiras associado com neosporose no sul do Brasil

Abstract Between December 2016 and April 2017, a spate of abortions occurred in a closed dairy herd from the central eastern region of Paraná, Brazil, in which 75 cows aborted. To identify its cause, organ fragments were collected from an aborted fetus for histopathology, and the blood samples from a stillborn, 4 aborted fetuses, and 9 farm dogs for indirect fluorescent antibody technique (IFAT). These tests found multifocal non-suppurative encephalitis, periportal hepatitis, and multifocal lymphoplasmacytic myocarditis, and detected anti-Neospora antibodies in all aborted fetuses, and in 5 of the 9 dogs. DNA of Neospora caninum was detected in the brain tissue of an aborted fetus. Blood samples of 340 cows and 146 heifers showed 33.5% and 30.8% seropositivity, respectively. In this closed herd, the parasite was probably introduced by infected domesticated or wild carnivores inhabiting the farm, through the infective oocysts present in their stool.

Resumo Um surto de abortamento com 75 abortos ocorreu em um rebanho fechado de vacas leiteiras da região centro Leste do Paraná entre dezembro e abril de 2017. Para chegar ao diagnóstico, fragmentos de órgãos foram coletados de um feto abortado e submetidos para histopatologia; e amostras de sangue foram coletadas de 1 natimorto, de 4 fetos abortados e de 9 cães da propriedade, para detecção de anticorpos pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram encontradas encefalite multifocal não supurativa, hepatite periportal e miocardite linfoplasmocitária multifocal. Anticorpos anti-Neospora foram detectados em todos os fetos abortados e em 5 dos 9 cães. DNA de N. caninum foi detectado no tecido cerebral de um dos fetos abortados. Amostras sanguíneas de 340 vacas e 146 novilhas mostraram uma soropositividade para N. caninum de 33,5% e 30,8%, respectivamente. Nesse rebanho fechado, o parasita foi introduzido possivelmente pelas fezes de cães domésticos ou selvagens infectados que habitam a propriedade.

Identification, molecular characterization and factors associated with occurrences of Cryptosporidium spp. in calves on dairy farms in Brazil / Identificação, caracterização molecular e fatores associados à ocorrência de Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Brasil

Abstract Cattle are an important source of zoonotic species of Cryptosporidium for humans. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium, identify the species and determine the risk factors relating to environment, animals and management among dairy calves in eight Brazilian states. A total of 408 fecal samples from calves aged 1-60 days were analyzed. An epidemiological questionnaire was completed. Sample screening was performed using Ziehl-Neelsen technique and the positive samples were subjected to nested PCR. Cryptosporidium species were identified by means of the PCR-RFLP technique, using SSPI, ASEI and MBOII enzymes. The Ziehl-Neelsen technique showed that 89.7% (35/39) of the farms and 52.9% (216/408) of the samples were positive. Through nested PCR, these protozoa were detected in 54.6% of the samples. The 56 samples subjected to PCR-RFLP presented Cryptosporidium parvum. There was higher prevalence of the parasite in animals aged 7 to 28 days (62.6%). Diarrhea, ages between seven and 28 days and a spring water source were factors associated with the risk of infection. The calf hutch-type management system was associated with reduced infection. These findings demonstrate the high level of Cryptosporidium spp. circulation in cattle herds and the predominance of the species C. parvum.

Resumo O gado é uma fonte importante de espécies zoonóticas de Cryptosporidium para o homem. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de Cryptosporidium, identificar a espécie e determinar os fatores de risco relacionados ao meio ambiente, aos animais e ao manejo em bezerros leiteiros em oito estados brasileiros. Um total de 408 amostras fecais de bezerros, com idade entre 1 e 60 dias, foram analisadas. Um questionário epidemiológico foi preenchido. A triagem das amostras foi realizada pela técnica de Ziehl-Neelsen, e as amostras positivas foram submetidas à "nested" PCR. As espécies de Cryptosporidium foram identificadas pela técnica de PCR-RFLP, utilizando-se as enzimas SSPI, ASEI e MBOII. A técnica de Ziehl-Neelsen mostrou que 89,7% (35/39) das fazendas e 52,9% (216/408) das amostras foram positivas. Por meio de nested PCR, esses protozoários foram detectados em 54,6% das amostras. As 56 amostras submetidas à PCR-RFLP apresentaram Cryptosporidium parvum. Houve maior prevalência do parasita em animais de 7 a 28 dias (62,6%). Diarreia, idade entre sete e 28 dias, e fonte de água mineral foram fatores associados ao risco de infecção. O sistema de manejo do tipo "casinha" para bezerros foi associado à redução da infecção. Esses achados demonstram o alto nível de Cryptosporidium spp. em circulação nos rebanhos bovinos e o predomínio da espécie C. parvum.

Macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. infection in tissues of cattle and sheep / Aspecto Macroscópico, histológico e molecular de Sarcocystis spp. em tecidos de bovinos e ovinos

Abstract The macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. were examined in the tissues of two cattle and four sheep, 16 and eight fragments analyzed respectively, condemned in the slaughterhouse. All 24 samples were collected and analyzed for detecting macrocysts and macroscopic lesions. Subsequently, subdivided for direct examination, polymerase chain reaction and histopathological examination. All sheep tissues samples had grossly white round to oval tissue cysts, ranging from 0.3 to 1 cm in diameter. In contrast, cattle tissues did not present grossly visible cysts but had randomly distributed white-yellow foci with irregular contours. All samples from cattle and sheep had microscopic cysts. In the histological examination of sheep tissues, circular to elongated, encapsulated, basophilic structures ranging from 30 to 3,000 µm in length and 20 to 1,000 µm in width were observed within the skeletal muscle fibers. In cattle tissues, all cardiac muscle four fragments analyzed contained circular to elongated basophilic structures inside cardiomyocytes and in some Purkinje fibers. PCR were performed using the primers: 2L and 3H. In conclusion, all 24 tissues were infected with Sarcocystis spp., and S. gigantea (in sheep) and S. cruzi (in cattle). were the identified species by sequencing.

Resumo Os aspectos macroscópicos, histológicos e moleculares de Sarcocystis spp. foram examinados nos tecidos de dois bovinos e quatro ovinos, 16 e oito fragmentos analisados, respectivamente, condenados no matadouro. Todas as 24 amostras foram coletadas e analisadas para detecção de macrocistos e lesões macroscópicas. Posteriormente, subdivididas para exame direto, reação em cadeia da polimerase e exame histopatológico. Todas as amostras de tecidos de ovelha apresentavam cistos grosseiramente visíveis, caracterizados como brancos, de redondos a ovais e estruturas variando de 0,3 a 1 cm de diâmetro. Em contraste, os tecidos de bovinos não apresentavam cistos grosseiramente visíveis, mas tinham focos branco-amarelos com contornos irregulares, distribuídos aleatoriamente. Todas as amostras de bovinos e ovinos apresentavam cistos microscópicos. No exame histológico de tecidos ovinos foram observadas estruturas basofílicas circulares a alongadas, encapsuladas, variando de 30 a 3.000 µm de comprimento e 20 a 1.000 µm de largura dentro das fibras do músculo esquelético. Nos tecidos de bovinos, todos os quatro fragmentos de músculo cardíaco analisados continham estruturas basofílicas circulares a alongadas, dentro dos cardiomiócitos e em algumas fibras de Purkinje. PCRs foram realizadas utilizando-se os "primers" 2L e 3H. Em conclusão, todos os 24 tecidos estavam infectados com Sarcocystis spp., sendo S. gigantea (em ovinos) e S. cruzi (em bovinos) as espécies identificadas por sequenciamento.

Abordagem cirúrgica em bezerros com onfalite / Surgical approach in calves with omphalitis

Pathological changes in the umbilical region are common in calves. Among such alterations, omphalitis is included. This term is used to define inflammation and infection of the external structures of the umbilicus. According to the affected structures, it can be subclassified into omphalophlebitis, omphaloarteritis, omphalourachitis and panvasculitis. These inflammations are usually associated with bacterial infections. There are predisposing conditions that include inadequate handling such as poor hygiene and neglect of primary care. Omphalitis can affect the animal in a multisystemic way, compromising its well-being and bringing economic losses. In treatment, the use of antimicrobials does not always solve the problem. Thus, surgical treatment can be used, which has good results and should be the choice in the disease. The objective of this work is to report 30 cases of omphalitis in calves, submitted to surgical or conservative treatment. Thirty cases of omphalitis in calves treated in the routine of the Veterinary Hospital of the Paranaense University was analyzed. On physical examination, the animals presented fever, apathy, hyporexia or anorexia and increase of umbilical volume, usually with purulent secretion. Some animals had sepsis and arthritis. In animals with sepsis, hyperemia of the episcleral vessels, dehydration and severe apathy were observed. In calves with arthritis, increased joint volume, pain on palpation and lameness were observed. In animals where the owners did not authorize the surgery, treatment was instituted with sulfadoxine and flunixim meglumine. In dehydrated calves, fluid therapy was used. Animals that were surgically treated received the same clinical treatment protocol as non-operated animals. The surgical procedure was performed under general anesthesia and consisted of resection of the affected umbilical structures. Omphalophlebitis was the most common illness. The most frequent complication was sepsis. Calves treated surgically had a higher survival rate (86.66%) than those treated clinically (46.67%). The clinical signs presented by all animals converged with the literature, allowing for clinical diagnosis. Clinical examination is essential for diagnosis in omphalitis cases. Complementary methods include ultrasound, thermography and laparoscopy, which are important to identify changes in intra-abdominal umbilical structures. Accurate diagnosis of the involved structures was only possible in animals surgically, as well as alterations in organs such as the liver and bladder. There is great variability related to the umbilical structures involved, according to initial care, breeds, seasonality or even the method of conception. Unlike what is observed in the literature, in the present study, there was a higher prevalence of omphalophlebitis, demonstrating variability in relation to the umbilical structures involved. Sepsis, observed in 16.7% of cases, results from bacterial ascension of the umbilical structures. Lameness due to polyarthritis was found in 10% of animals. Meningoencephalitis was observed in 3.3%. Hepatic and retroperitoneal abscedation were observed in 6.7% and 3.3% of cases, respectively. Conservative treatment with antibiotics and local antiseptics has a limited effect on this type of condition, which was proven in the present study, since the survival rate was statistically higher in animals surgically treated.(AU)

Seroepidemiology of Toxoplasma gondii in domestic cattle, sheep, goats and pigs from São Tomé and Príncipe / Soroepidemiologia de Toxoplasma gondii em bovinos, ovinos, caprinos e suínos domésticos de São Tomé e Príncipe

Abstract Despite the global importance of the zoonotic parasite Toxoplasma gondii, little is known regarding its infection in the Democratic Republic of São Tomé and Príncipe (DRSTP). This is the first report of antibodies to T. gondii in cattle, sheep, goats and pigs from the DRSTP. Antibodies were assessed by the modified agglutination test (MAT), with a cut-off titer of 100 for cattle and 20 for sheep, goats and pigs. The present study revealed an overall seroprevalence of 55.8%; 27.1% in 48 cattle, 68.4% in 98 sheep, 70.1% in 97 goats and 43.7% in 103 pigs. The south geographical area for cattle, the central area for sheep, and adult age and living in the central region for goats were found to be risk factors for seropositivity to T. gondii. These results support the scenario of a considerable presence of sporulated oocysts as well as of infected intermediate hosts in the local environment. Consumption of raw or undercooked meat should be considered as an important potential source of infection for animals and humans in the DRSTP.

Resumo Apesar da importância global do parasita zoonótico Toxoplasma gondii, pouco se conhece sobre sua infecção na República Democrática de São Tomé e Príncipe (RDSTP). Esse é o primeiro relato de anticorpos para T. gondii em bovinos, ovinos, caprinos e suínos da RDSTP. Os anticorpos foram pesquisados pelo teste de aglutinação direta modificada (TADM), com um título de corte de 100 para bovinos e de 20 para ovinos, caprinos e suínos. O presente estudo revelou uma soroprevalência global de 55,8%: 27,1% em 48 bovinos, 68,4% em 98 ovinos, 70,1% em 97 caprinos e 43,7% em 103 suínos. A área geográfica sul para os bovinos, a área central para os ovinos, bem como a idade adulta e a região central para os caprinos foram considerados fatores de risco para soropositividade a T. gondii. Esses resultados suportam o cenário de uma considerável presença de oocistos esporulados, bem como de hospedeiros intermediários infectados no ambiente local. O consumo de carne crua ou mal passada deve ser considerado como uma importante fonte potencial de infecção para animais e seres humanos na RDSTP.

Characterization of cattle tick fever in calves from the northwestern region of Minas Gerais, Brazil / Caracterização do complexo da Tristeza Parasitária Bovina em bezerros da região noroeste de Minas Gerais, Brasil

Abstract The present study aimed to characterize the importance of the Anaplasma marginale, Babesia bovis and Babesia bigemina in the genesis of cattle tick fever (CTF) among dairy calves in the northwest of Minas Gerais, Brazil. Blood samples from 300 calves were collected, followed by DNA extraction and nested PCR using oligonucleotide primers to amplify fragments of the semi-nested for the msp5 gene (A. marginale), sbp-4 (B. bovis) and rap-1a (B. bigemina) Among the examined calves, the prevalence of A. marginale was 55.6% (n=167/300), B. bovis was 4.0% (n=12/300) and B. bigemina was 15.3% (n=46/300), by PCR techniques. Parasitic forms of A. marginale and B. bigemina were found in 36,3% and 2,6% of the blood smears while B. bovis was not detected. There was a statistical difference between the positivity of infected animals in the age groups 1 (10-70 days) and (>70-300 days) for A. marginale and B. bigemina. A total of 15 calves with the classic symptoms of disease were examined, and the samples obtained were confirmed as a simple infection by A. marginale through semi-nested PCR. These results confirm bovine anaplasmosis as the primary cause of CTF among the calves of dairy cattle within the studied area.

Resumo O presente estudo teve como objetivo caracterizar a importância de Anaplasma marginale, Babesia bigemina e Babesia bovis na gênese da tristeza parasitária bovina em bezerros leiteiros do noroeste de Minas Gerais. Foram coletadas 300 amostras sanguíneas de bezerros, seguidas por extração de DNA e Nested- PCR utilizando oligonucleotídeos iniciadores que amplificam fragmentos dos genes sbp-4 (B. bovis) e rap-1a (B. bigemina) e a Semi-Nested para o gene msp5 (A. marginale). A prevalência de A. marginale foi 55,66% (167/300), B. bigemina, 15,33% (46/300) e B. bovis 4,0% (12/300) dos bezerros examinados. Formas parasitárias de A. marginale and B. bigemina foram encontradas em 36,33% e 2,66% dos esfregaços sanguíneos, enquanto B. bovis não foi detectado. Houve diferença estatística entre as prevalências de animais infectados nas faixas etárias 1 (10-70 dias) e 2 (>70-300 dias). Um total de 15 animais com sintomas clássicos da doença foram examinados, e as amostras foram confirmadas como uma infecção simples por A. marginale através da Nested-PCR. Esses resultados confirmam a anaplasmose bovina como a principal agente da tristeza parasitária bovina nos bezerros do rebanho estudado.

Fascioliasis in buffaloes: A 5-year forecast analysis of the disease based on a 15-year survey in Brazil / Fasciolose em búfalos: uma análise de previsão de 5 anos da doença com base em uma pesquisa de 15 anos no Brasil

Abstract In South America, fascioliasis caused by the trematode Fasciola hepatica is an anthropozoonosis disease associated with significant economic losses and poor animal welfare. The objective of this study was to determine the prevalence of F. hepatica in the liver of buffaloes slaughtered from 2003 to 2017 in Brazil, and to perform a forecast analysis of the disease for the next five years using the Autoregressive Integrated Moving Average (ARIMA) model. Data analysis revealed an incidence of 7,187 cases out of 226,561 individuals. The disease presented a considerable interannual variation (p<0.005). Fasciola hepatica was more prevalent in the southern states of Brazil; Paraná, Rio Grande do Sul, and Santa Catarina, presenting 11.9, 7.7, and 3.2% of infected livers, respectively. The high frequency of liver condemnation in Paraná was influenced by weather conditions. The ARIMA models calculated a constant trend of the disease, depicting an average of its future prevalence. The models also described a worse-case and a positive-case scenario, calculating the effects of intervention measurements. In reality, there is an urgent need for regular diagnostic in the animals (fecal and immune diagnose) and in the environment (intermediate host), in order to avoid the high rates of infection.

Resumo Na América do Sul, a fasciolose causada pelo Trematoda Fasciola hepatica é uma antropozoonose associada a perdas econômicas significativas e baixo grau de bem-estar animal. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de F. hepatica no fígado de búfalos abatidos entre 2003 a 2017 e realizar uma análise de previsão da doença para os próximos cinco anos, utilizando o modelo Auto-Regressivo Integrado de Médias Móveis (ARIMA). A análise dos dados revelou uma incidência total de 7.187 casos em 226.561 indivíduos. Houve um acentuado grau de variação interanual nas taxas de prevalência (p<0,005). Fasciola hepatica foi mais prevalente nos estados do sul do Brasil; Paraná, Rio Grande do Sul e Santa Catarina, com 11,9; 7,7; e 3,2% de fígados condenados, respectivamente. A alta incidência de condenação de fígado no Paraná foi influenciada pelo fator climático. Os modelos ARIMA indicaram uma tendência constante na ocorrência da doença, destacando um padrão futuro da doença. Os modelos também descreveram cenários de piora e de possível melhoria, calculando os efeitos de medidas de intervenção. Assim, existe a urgência de realizar diagnóstico constante nos animais (coprológico e diagnóstico imunológico) e no ambiente, para que se evite os altos índices de infecção.

Molecular detection of Leishmania spp. in cattle from Brazil by means of PCR using internal transcribed spacer 1 / Detecção molecular de Leishmania spp. em gado no Brasil por PCR com espaçador interno transcrito 1

Abstract Leishmania spp. are important agents of human and animal leishmaniases that have an important impact on public health. In this study, we aimed to detect the circulation of Leishmania spp. in cattle from a visceral leishmaniasis non-endemic area of the state of São Paulo, Brazil. DNA was extracted from blood samples from 100 heifers in the municipality of Pirassununga and was amplified using primers specific for the first internal transcriber spacer (ITS1), to assess the presence of trypanosomatids. The assays revealed that one sample presented bands of between 300 and 350 base pairs. In GenBank, this sample matched 100% with Leishmania infantum (314 base pairs). The results suggest that cattle can be infected by Leishmania infantum in Brazil.

Resumo Leishmania spp. são agentes causadores das leishmanioses em humanos e em animais, gerando grande impacto à saúde pública. Este estudo objetivou detectar a circulação de Leishmania spp. em área não endêmica para leishmaniose visceral de São Paulo, Brasil. Foram extraídas amostras de DNA de 100 novilhas da cidade de Pirassununga. Estas amostras foram amplificadas com os iniciadores específicos para tripanosomatídeos Internal Transcriber Spacer 1 (ITS1). Os ensaios revelaram uma amostra com bandas entre 300 e 350 pares de base (pb). A amostra demonstrou 100% de identidade com Leishmania infantum (314 pb). Os resultados sugerem que o gado pode ser infectado por L. infantum no Brasil.

Primer aislamiento de Mycoplasma leachii asociado a enfermedad en terneros de tambo en Argentina / First report of Mycoplasma leachii isolation associated with disease in dairy calves in Argentina

There are few reports about the isolation of Mycoplasma species associated with cattle disease in Argentina. In this work we describe the detection of Mycoplasma leachii associated with disease in dairy calves in Santa Fe Province, Argentina. Samples obtained from a 4 day-old dairy calf suffering from polyarthritis and from two other calves, one with arthritis and the other one with a mandibular abscess, were subjected to microbiological culture. Classical culture and generic PCR confirmed the presence of Mycoplasma spp. The spacer region between the 16S and 23S ribosomal RNA gene from the first isolate was amplified and sequenced. The sequence obtained showed 99% identity with M. leachii. A PCR was developed to amplify a specific fragment of the 16S-23S ITS region corresponding to M. leachii, which allowed to identify the isolates associated with disease in calves.

Existen pocos informes acerca del aislamiento de especies de Mycoplasma asociadas con enfermedades del ganado en Argentina. En esta comunicación se describe el aislamiento de Mycoplasma leachii asociado a enfermedad en terneros de tambo en la provincia de Santa Fe, Argentina. Se obtuvieron muestras de un ternero de 4 días de vida con poliartritis, de un ternero con artritis y uno con un absceso mandibular. A partir del cultivo clásico se detectó la presencia de Mycoplasma, lo cual fue confirmado por PCR genérica. Se amplificó y secuenció la región ITS 16S-23S a partir del primer aislamiento, mostrando una identidad del 99% con Mycoplasma leachii. Se desarrolló una PCR para amplificar un fragmento específico de la región ITS 16S-23S correspondiente a M. leachii, que permitió identificar los aislamientos asociados con enfermedad en terneros.

Occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in cattle in the dairy farming region of the state of Piauí, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti- Neospora caninum em vacas na bacia leiteira do estado do Piauí, Brasil

Abstract This study focused on the detection of anti-Neospora caninum IgG antibodies in cows in the dairy farming region of the state of Piauí, Brazil. To this end, serum samples were collected from 255 dairy cows on 17 farms located in the dairy farming region of the municipality of Parnaíba, Piauí, Brazil. The indirect fluorescence antibody test (IFAT) was employed to detect anti-N. caninum IgG antibodies, using anti-bovine IgG (Sigma®) conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC) and a cutoff point of 1:200. Of the 255 samples analyzed, 69 (27.06%) were positive for anti- N. caninum IgG antibodies, the relative frequency found by property was: 1 (20.00%), 2 (53.33%), 3 (46.66%), 4 (53.33%), 5 (26.66%), 6 (6.66%), 7 (6.66%), 8 (20.00%), 9 (26.66%), 10 (26.66%), 11 (20.00%), 12 (20.00%), 13 (46.66%), 14 (26.66%), 15 (26.66%), 16 (20.00%) and 17 (13.33%). with titers of 200 (15.94%), 400 (20.30%), 800 (24.63%), 1600 (23.18%) and 3200 (15.94%), being the highest frequency for the titer of 800. This study demonstrates for the first time that cows from dairy herds of Parnaíba municipality, state of Piauí, are exposed to N. caninum.

Resumo Objetivou-se estudar a ocorrência de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas, na bacia leiteira do estado do Piauí, Brasil. Foram obtidas amostras séricas de 255 vacas leiteiras provenientes de 17 propriedades localizadas na bacia leiteira do município de Parnaíba, Piauí, Brasil. Para a pesquisa de anticorpos IgG anti- N. caninum foi empregada a técnica de Reação de Imunofluorescência Indireta, utilizando-se conjugado anti-IgG bovine (Sigma®) conjugado ao isotiocianato de fluoresceína e ponto de corte 1:200. Das 255 amostras analisadas, 69 (27,06%) foram positivas para anticorpos IgG anti- N. caninum, a frequência relativa encontrada por propriedade foi de: 1 (20,00%), 2 (53,33%), 3 (46,66%), 4 (53,33%), 5 (26,66%), 6 (6,66%), 7 (6,66%), 8 (20,00%), 9 (26,66%) 10 (26,66%), 11 (20,00%), 12 (20,00%), 13 (46,66%), 14 (26,66%), 15 (26,66%), 16 (20,00%) e 17 (13,33%) com títulos de 200 (15,94%), 400 (20,30%), 800 (24,63%), 1600 (23,18%) e 3200 (15,94%), sendo a maior frequência para o título de 800. Este estudo demonstra pela primeira vez que, vacas de rebanhos leiteiros do município de Parnaíba, estado do Piauí, estão expostas ao N. caninum.

Theileria sp. in water buffaloes from Maranhão State, northeastern Brazil / Theileria sp. em búfalos do Estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Abstract Anaplasma marginale and piroplasm species are widespread among Brazilian cattle herds. Both of these tick-borne pathogens hamper livestock production and cause a significant economic impact. Although buffaloes have demonstrated a high level of adaptability, data on tick-borne pathogens are scarcely reported in Brazil. Thus, the aim of this study was to screen water buffaloes from the state of Maranhão for piroplasm and A. marginale occurrence using PCR assays. All samples were negative for A. marginale. One of the 287 (0.35%) water buffaloes tested was positive for Theileria sp. Sequencing of the 18S rDNA fragment (356 bp) showed that the Theileria sp. identified was closely related to the T. buffeli /orientalis group. Future studies on the clinical signs of infection and the main vector in this country are needed.

Resumo Anaplasma marginale e espécies de piroplasma são amplamente distribuídas no rebanho bovino brasileiro. Ambos os patógenos transmitidos por carrapatos dificultam a produção pecuária e causam um impacto econômico significativo. Embora os búfalos tenham demonstrado um alto nível de adaptabilidade, dados sobre patógenos transmitidos por carrapatos são raramente relatados no Brasil. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar búfalos do estado do Maranhão para piroplasmas e A. marginale utilizando-se a técnica da PCR. Todas as amostras foram negativas para A. marginale . Um dos 287 (0,35%) búfalos testados foi positivo para Theileria sp. O sequenciamento de um fragmento do gene 18S rDNA (356 pb) demonstrou que Theileria sp. identificado estava relacionada ao grupo T. buffeli/orientalis . Estudos futuros sobre os sinais clínicos de infecção e o principal vetor neste país são necessários.

Genetic diversity and molecular survey of Trypanosoma (Megatrypanum ) theileri in cattle in Brazil's western Amazon region / Diversidade genética e levantamento molecular de Trypanosoma (Megatrypanum) theileri em bovinos na região da Amazônia Ocidental do Brasil

Abstract Trypanosoma (Megatrypanum) theileri is a flagellated protozoan that infects ruminants and it displays high genetic diversity. In this study, we investigated the prevalence rates of this protozoan based on hemoculture and molecular diagnosis. The isolates of T. theileri thus obtained were characterized by molecular markers SSU rDNA and gGAPDH and molecular diagnosis based on Cathepsin L-like gene (PCR-TthCATL). The PCR-TthCATL and hemoculture indicated an overall prevalence rate of 8.13%, and the CATL derived sequence named IB was identified for the first time in cattle in the western Amazon region, as well as IF in Brazil. We also describe a possible new PCR-TthCATL derived sequence in cattle, designated IL.

Resumo Trypanosoma (Megatrypanum) theileri é um protozoário flagelado que infecta ruminantes e apresenta alta diversidade genética. Neste estudo, investigamos as taxas de prevalência deste protozoário com base na hemocultura e no diagnóstico molecular. Os isolados de T . theileri obtidos foram caracterizados pelos marcadores moleculares SSU rDNA e gGAPDH e o diagnóstico molecular foi baseado no gene do tipo Catepsina L (PCR-TthCATL). O PCR-TthCATL e a hemocultura indicaram uma taxa de prevalência total de 8,13% e a sequência derivada do gene Catepsina L denominada IB de T. theileri foi identificada pela primeira vez em bovinos da Amazônia Ocidental, bem como a IF no Brasil. Também descrevemos uma possível nova sequência derivada da PCR-TthCATL em bovinos, designada IL.

Seroprevalence, spatial analysis and risk factors of infection with Neospora caninum in cattle in Brazil's northern Pantanal wetland / Soroprevalência, análise espacial e fatores de risco da infecção por Neospora caninum em bovinos no Pantanal norte do Brasil

Abstract Neosporosis is caused by an obligate intracellular protozoan, Neospora caninum . It is considered one of the most widespread and frequent causes of abortion in cattle worldwide. To evaluate the prevalence of anti-N. caninum antibodies and associated risk factors, serum samples were collected from 2,452 bovines at 262 farms in the northern Pantanal, state of Mato Grosso, Brazil. Each farmer was asked to fill out a questionnaire for subsequent epidemiological data analysis. Anti-N. caninum antibodies were detected by means of the indirect immunofluorescent assay (IFA), using a cut-off dilution of 1:100. The overall anti-N. caninum antibodies prevalence was 25.44% (Confidence Interval - CI 95%; 20.10%; 30.78%), and the anti-N. caninum antibodies prevalence per herd was 76.72% (CI 95%; 71.60%; 81.84%). The presence of dogs, occurrence of abortion in cows, and sale of cattle for breeding were statistically associated with seropositivity in herds, while the risk of females being seropositive for N. caninum was higher in animals ≤ 6-years-old and in the presence of dogs. A spatial analysis indicated that the relative risk of the disease is spatially constant and that the farms with the highest prevalence of anti-N. caninum antibodies are located south of the region under study.

Resumo Neosporose é causada por um protozoário intracelular obrigatório, Neospora caninum. É considerada uma das causas mais comuns e frequentes de aborto em bovinos em todo o mundo. Para avaliar a prevalência de anticorpos anti- N. caninum e fatores de risco associados, amostras de soro foram coletadas de 2.452 bovinos em 262 fazendas no Pantanal norte, estado de Mato Grosso, Brasil. Cada fazendeiro preencheu um questionário para posterior análise dos dados epidemiológicos. Anticorpos anti-N. caninum foram detectados por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando um ponto de corte de 1:100. A prevalência total de anticorpos anti-N. caninum foi de 25,44% (Intervalo de Confiança - IC 95%; 20,10%; 30,78%) e a prevalência por rebanho foi de 76,72% (IC 95%; 71,60%; 81,84%). A presença de cães, a ocorrência de abortamento em vacas e a venda de bovinos para reprodução estiveram estatisticamente associadas à soropositividade em rebanhos, enquanto, o risco de fêmeas serem soropositivas para N. caninum foi maior em animais com idade ≤ 6 anos e na presença de cães. A análise espacial indicou que o risco relativo da doença é espacialmente constante e que as fazendas com maior prevalência de anticorpos anti-N. caninum estão localizados ao sul da região em estudo.

Prevalence and associated factors with Neospora caninum infection in female water buffaloes (Bubalus bubalis) from Pernambuco, Brazil / Prevalência e fatores associados à infecção por Neospora caninum em fêmeas bubalinas (Bubalus bubalis ) em Pernambuco, Brasil

Abstract Neosporosis is one of the major parasitic diseases that causes reproductive problems, making it a limitation for optimal efficiency in livestock. The aim of the present study was to conduct a seroepidemiological survey for bubaline neosporosis and to analyse associated factors associated with N. caninum infection in female water buffaloes in the State of Pernambuco, northeast Brazil. The prevalence of N. caninum infection in the bubaline herds examined was 35.4% (122/345; 95% CI: 30.4%-40.7%), at least 1 Neospora-positive animal was found in each farm. Associated factors for N. caninum infection identified in this study were exclusive pasture feeding (OR: 5.91, p <0.001) and purchase of animals of free fair and from reputable sellers (OR: 1.85; p =0.045). In this survey, we document the occurrence of neosporosis in female water buffaloes. Associated factors should be controlled in order to reduce the risk of N. caninum infection in these herds.

Resumo A neosporose é uma das principais doenças parasitárias que causa problemas reprodutivos, torna-se possível limitar para a máxima eficiência na pecuária. Objetivou-se com este estudo realizar um inquérito soroepidemiológico e analisar os fatores associados à infecção por N. caninum em fêmeas bubalinas no estado de Pernambuco, Brasil. Observou-se uma prevalência de 35,4% (122/345; IC 95%: 30,4%-40,7%) para infecção por N. caninum e 100% das propriedades possuíam ao menos um animal positivo. Os fatores associados à infecção por N. caninum neste estudo foram alimentação exclusiva a pasto (OR: 5,91; p<0,001) e aquisição de animais de feiras livres e criadores conhecidos (OR: 1,85; p=0,045). Registra-se a ocorrência da infecção por N. caninum em fêmeas bubalinas e os fatores associados que precisam ser corrigidos para reduzir o risco de infecção nesses rebanhos.

Evaluation of dot-blot test for serological diagnosis of bovine brucellosis

Abstract The objective of this study was to standardize and validate the dot-blot test for the serological diagnosis of bovine brucellosis, compare the results with those found in the 2-mercaptoethanol (2-ME) and complement fixation test (CF), and estimate the relative sensitivity and specificity of the dot-blot compared to these tests. Fifty bovine blood serum samples were used for the test standardization, and 1315 samples were used for evaluation and comparison between the tests; the results were compared using the Kappa indicator. At the end of standardization, it was established as optimal for the antigen obtained from Brucella abortus B19 after passing through a microorganism rupture process, the blood serum samples diluted at 1:100, and the conjugate at 1:30,000. The comparison of the dot-blot results with 2-ME showed Kappa index of 0.9939, sensitivity of 99.48%, and specificity 99.91%, with CF, Kappa index of 0.8226, sensitivity 100% and specificity 95.32%. Using the combination of the test results 2-ME and CF to establish the true condition of the animal, the dot-blot showed relative sensitivity of 100%, and relative specificity of 99.91%. The evaluated test proved to be effective and reliable, besides being easy to handle and interpret the results.

Detección de Chlamydia abortus en pérdidas reproductivas de bovinos en la provincia de La Pampa, Argentina / Detection of Chlamydia abortus in bovine reproductive losses in the province of La Pampa, Argentina

Las pérdidas reproductivas constituyen una causa importante de pérdida económica en el ganado bovino, aunque en más del 50% de los casos la etiología es desconocida. Las especies de la familia Chlamydiaceae han sido asociadas con abortos en bovinos y otras espeChlamydia abortus; cies animales, pero no existen datos al respecto en la República Argentina. El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de Chlamydia spp. y de Chlamydia abortus en pérdidas reproductivas de ganado bovino en La Pampa, Argentina. Se estudiaron 251 muestras provenientes de abortos y mortinatos. Se realizó PCR en tiempo real para la detección de la familia Chlamydiaceae y ArrayTube para la identificación de las especies presentes. Se detectó ADN de la familia Chlamydiaceae en 12 muestras (4,78%); el 83,33% (10/12) correspondió a abortos y el 16,66% (2/12) a mortinatos. El análisis por ArrayTube detectó C. abortus en 5 muestras (1,99% del total, 41,67% de las muestras con detección de Chlamydiaceae). Este trabajo presenta la primera confirmación de la presencia de ADN de diversas especies de Chlamydiaceae (incluida C. abortus) en muestras de pérdidas reproductivas de ganado bovino en Argentina. El valor de prevalencia hallado (4,78%) debe ser tomado como un valor basal, debido al tipo de muestras estudiadas. Se halló material genético de Chlamydiaceae que no coincidió con ninguna de las especies conocidas; esto podría deberse a variantes intraespecie o a especies autóctonas aún no descriptas. Es necesario avanzar en el estudio de la infección por estas bacterias en el ganado bovino de Argentina para conocer su dimensión y analizar su impacto económico y zoonótico, y también para planear medidas de prevención y control.

Reproductive losses linked to an infectious etiology in bovine cattle are a major economic concern worldwide. In Argentina, more than 50% of abortion cases have unknown causes. Species belonging to Chlamydiaceae family are frequent etiologic agents of abortion around the world; however, there is yet no information on their prevalence in Argentina. The objective of this work was to identify Chlamydia spp., and particularly C. abortus in reproductive losses from bovine cattle in La Pampa, Argentina. Real time PCR targeting Chlamydiaceae-specific DNA fragments was performed on 251 samples obtained from bovine abortions and stillborns, and ArrayTube was used for species identification on positive samples. Chlamydiaceae DNA was detected in 12 samples of aborted fetuses (4.78%), 83.33% (10/12) accounting for abortions and 16.66% (2/12) for stillborns. C. abortus was detected by ArrayTube in 5 cases (1.99% of all samples, and 41.67% of Chlamydiaceae positive samples). This study shows the first detection of Chlamydiaceae and C. abortus DNA on reproductive losses of bovine cattle in Argentina, and the described prevalence value (4.78%) should be taken as baseline value due to the type of samples analyzed. Detection of genetic material from Chlamydiaceae not matching any of the studied species could be due to intraspecies variants or local species not yet described. Further research on Chlamydia infections in bovine cattle in Argentina is imperative to describe their range, to analyze their economic and zoonotic implications and to make recommendations about prevention and control measures.